Técnicas de Edición Genómica

El fenotipo de CRISPRi de alto rendimiento identifica nuevos genes escenciales en Streptococcus pneumoniae.

El fenotipo CRISPRi se utilizo para construir una biblioteca de expresión de genes esenciales neumocócicos.

Se diseño un sgRNA para cada uno de los 391 genes potencialmente esenciales.

Basado e el plásmido sgRNA luc se probó dos estrategias de clonación:

1. Clonación por infusión.

2. PCR inversa.

Se analizaron los efectos de la represión basada en CRISPRi sobre la morfología celular utilizando 69 genes.

Mediante el análisis morfológico de las cepas CRIPSPRi para la represión de la transcripción de genes con función conocida de diferentes vías, establecimos vínculos entre genotipos y fenotipos.

Referencias Bibliográficas:

Xue Liu1,2 , Clement Gallay1 , Morten Kjos1,3 , Arnau Domenech1 , Jelle Slager. High-throughput CRISPRi phenotyping identifies new essential genes in Streptococcus pneumoniae. Beijing, China. (actualizado el 13 de abril del 2017, acceso el 23 de junio del 2019). Disponible en:https://www.embopress.org/doi/pdf/10.15252/msb.20167449